細胞培養操作規程，供參考
一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備F-12K培養基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過(guò)夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。

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公司細胞現貨供應，質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗效果好，我司為您提供免費代測服務(wù)，同時(shí)提供最新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規格、用途、實(shí)驗原理等相關(guān)操作說(shuō)明。公司產(chǎn)品僅用于科研，不得用于臨床．

注意事項：
1.收到細胞后，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細胞先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置2-4小時(shí)（視細胞密度而定）穩定細胞狀態(tài)。接著(zhù)在倒置顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況，并對細胞進(jìn)行不同倍數拍照（建議收細胞時(shí)就整體外觀(guān)拍一張照片，觀(guān)察培養基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀(guān)察記錄細胞在運輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷(xiāo)售依據。
3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸等多方面因素影響，故本公司只保證客戶(hù)收到細胞后一周內的細胞狀態(tài)，故客戶(hù)需要售后時(shí)需出示收到細胞的時(shí)間證明及客戶(hù)提供收貨時(shí)間和發(fā)現問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
腺苷酸環(huán)化酶9抗體

細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀(guān)察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀(guān)察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉入液氮罐儲存。

B2M Others Cynomolgus 食蟹猴 B2M / Beta-2-microglobulin 人細胞裂解液 (陽(yáng)性對照) Esculinsesquihydrate馬栗樹(shù)皮苷1克AR，98%

大鼠腎成纖維細胞*培養基 100mL克羅米通 CrotcMiton 483-63-6

AE-2雜交瘤細胞抗AChE AE-2 hybridoma cells against AChE DMEM+10% Hyclone 滅活血清8-羥基shēng huà shì jì容量：RT250毫升

WISP1 Protein Human 重組人 CCN4 / WISP1 蛋白 (His 標簽)脂多糖，英文名或英文縮寫(xiě)：LPS，級別：高，98%，規格：500U

Hela S3(人細胞) 5×106cells/瓶×2 角質(zhì)細胞培養基KM-acf2’-Deoxy-D-Ribose 1g原裝/5g原裝/10g原裝 INALCO1521/31
HBEGF Protein Human 重組人 HBEGF / D 蛋白雙(亞甲基二硫代)四硫富瓦1[有機電子材料]Bis(methylenedithio)tetrathiafulvalene [Organic Electronic Material]質(zhì)量規格：

TE-13(人食管癌細胞) 5×106cells/瓶×2 心肌成纖維細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)雙(三亞甲基二硫代)四硫富瓦1[有機電子材料]Bis(trimethylenedithio)tetrathiafulvalene [Organic Electronic Material]質(zhì)量規格：>97.0%(HPLC)

小鼠垂體瘤細胞;GT1-1四硫富瓦1(>98.0%(GC))Tetrathiafulvalene質(zhì)量規格：>98.0%(GC)

人表皮微血管內皮細胞(HDMEC)( 5×105 )四(甲硫代)四硫富瓦1[有機電子材料]Tetrakis(methylthio)tetrathiafulvalene [Organic Electronic Material]質(zhì)量規格：>98.0%(T)

Raji，人Butt's瘤細胞四(十八烷基硫代)四硫富瓦1[有機電子材料]Tetrakis(octadecylthio)tetrathiafulvalene [Organic Electronic Material]質(zhì)量規格：>98.0%(T)
小鼠肺泡巨噬細胞ANGPTL5 Protein Human 重組人 ANGPTL5 蛋白 (GST 標簽)山梨酸Sorbic acid質(zhì)量規格：AR,99%

Li-7(人肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2 SARS Spike S1 Subunit 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細胞裂解液 (陽(yáng)性對照) DL-丙氨酰-DL-正纈氨酸DL-Alanyl-DL-norvaline質(zhì)量規格：0.99

牛腎細胞;MDBK3-(1-萘基)-L-丙氨酸3-(1-Naphthyl)-L-alanine質(zhì)量規格：>98%,BR

LILRB2 Others Human 人 LILRB2 / ILT4 / LIR-2 人細胞裂解液 (陽(yáng)性對照) Fmoc-3-(2-萘基）-D-丙氨酸Fmoc-3-(2-Naphthyl)-D-alanine質(zhì)量規格：0.98

腎系膜細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)L-瓜氨酸L-Citrulline 質(zhì)量規格：>99%,BR
細胞接受后的處理：
1） 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。若發(fā)現污染或疑似污染，請及時(shí)與我們取得聯(lián)系。
2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長(cháng)狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。
3） 棄去T25瓶中的培養基，添加6ml新的的*培養基。
4） 如果細胞長(cháng)滿(mǎn)（90%以上）請及時(shí)進(jìn)行細胞傳代。
5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，