細胞培養操作規程，供參考
一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備F-12K培養基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過(guò)夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。

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公司細胞現貨供應，質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗效果好，我司為您提供免費代測服務(wù)，同時(shí)提供最新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規格、用途、實(shí)驗原理等相關(guān)操作說(shuō)明。公司產(chǎn)品僅用于科研，不得用于臨床．

注意事項：
1.收到細胞后，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細胞先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置2-4小時(shí)（視細胞密度而定）穩定細胞狀態(tài)。接著(zhù)在倒置顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況，并對細胞進(jìn)行不同倍數拍照（建議收細胞時(shí)就整體外觀(guān)拍一張照片，觀(guān)察培養基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀(guān)察記錄細胞在運輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷(xiāo)售依據。
3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸等多方面因素影響，故本公司只保證客戶(hù)收到細胞后一周內的細胞狀態(tài)，故客戶(hù)需要售后時(shí)需出示收到細胞的時(shí)間證明及客戶(hù)提供收貨時(shí)間和發(fā)現問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
腺苷酸環(huán)化酶9抗體

細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀(guān)察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀(guān)察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉入液氮罐儲存。

小鼠海馬趾神經(jīng)細胞(MH-h)(1×106) HCT116, 人結直腸癌細胞 Human豬血清(無(wú)菌)shēng huà shì jì容量：RT25克

家貓皮膚細胞;FCA-S1噠螨靈 Pyridaben 96489-71-3 250MG 通用試劑

ERBB3 Others Human 人 HER3 / ErbB3 (aa 730-1065) 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細胞裂解液 (陽(yáng)性對照) L-炳安醋 L-clcninq;(S)-2-cMinopropionic ccid;L-2-cMinopropionic ccid 26-41-7

CL-0097HCT-15(人結腸癌細胞)5×106cells/瓶×2鉍shēng huà shì jì容量：25克

RBE, 人肝膽管癌細胞 前列腺癌細胞,LNCaP clone FGC細胞 NCI-H661(大細胞肺癌細胞)328-84-73,4-二錄三扶3,4-Dichlorobenzotrifluoride
角膜內皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)優(yōu)級真空泵油(Viscosity Grade 100)Vacuum pump oil質(zhì)量規格：Viscosity Grade 100

小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(EGFP標記) 人肺腺癌細胞，SW 1271[SW-1271;SW1271]細胞 LLC Lewis(肺癌細胞)優(yōu)級真空泵油(Viscosity Grade 150)Vacuum pump oil質(zhì)量規格：Viscosity Grade 150

人神經(jīng)母細胞瘤細胞;BE(2)-M17紫尿酸 一水合物(97%)Violuric acid monohydrate質(zhì)量規格：0.97

TIMD4 Others Mouse 小鼠 TIMD4 / TIM4 人細胞裂解液 (陽(yáng)性對照) 生育酚乙酸酯(標準品)Vitamin E acetate質(zhì)量規格：分析標準品

中國倉鼠卵巢細胞;TPO-CHO-I1效唑(分析標準品97.5%)Uniconazole質(zhì)量規格：分析標準品97.5%
人急性B淋巴細胞白血病細胞人小腸粘膜上皮細胞*培養基 100mL達托霉素Daptomycin質(zhì)量規格：≥930μg/mg,BR,可用于細胞培養

P388細胞，小鼠白血病細胞 空腸彎曲桿菌 大額牛皮膚成纖維樣細胞;BOS-1達托霉素(標準品)Daptomycin質(zhì)量規格：效價(jià)測定

CCL20 Protein Mouse 重組小鼠 CCL20 / MIP-3 alpha 蛋白 (His 標簽)鹽酸柔紅霉素Daunorubicin HCl質(zhì)量規格：度大于97%含量84.0-102%,USP30

P815(小鼠肥大細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 人 CD1B & B2M Heterodimer 人細胞裂解液 (陽(yáng)性對照) 鹽酸柔紅霉素(標準品)Daunorubicin HCl質(zhì)量規格：HPLC≥98%,標準品

人結直腸腺癌細胞;HCT 116 [HCT116]鹽酸柔紅霉素(進(jìn)口)Daunorubicin HCl質(zhì)量規格：USP,進(jìn)分sigmaD8809
細胞接受后的處理：
1） 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。若發(fā)現污染或疑似污染，請及時(shí)與我們取得聯(lián)系。
2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長(cháng)狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。
3） 棄去T25瓶中的培養基，添加6ml新的的*培養基。
4） 如果細胞長(cháng)滿(mǎn)（90%以上）請及時(shí)進(jìn)行細胞傳代。
5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，