冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(cháng)期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(cháng)期儲存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

實(shí)驗操作步驟：  公司產(chǎn)品僅用于科研，不得用于臨床．
a．采用認可的方案處死嚙齒動(dòng)物。    
b．立即在無(wú)菌超凈臺內用70％乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。  
c．用無(wú)菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無(wú)菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無(wú)菌的剪刀和鑷子切開(kāi)腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無(wú)菌的培養皿上。   
e．剔除胚胎周?chē)陌?，將胚胎放于無(wú)菌的含有無(wú)菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

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實(shí)驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)； 
3、50ml離心筒2個(gè) 
4、滅菌培養皿1個(gè)，細胞培養瓶1個(gè) 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6、細胞計數板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；
細胞培養的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對象是活細胞
在實(shí)驗過(guò)程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長(cháng)時(shí)間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗觀(guān)察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過(guò)細胞培養一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類(lèi)型的細胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究?jì)热荼阌谟^(guān)察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備 
記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；
適用的對象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對性的研究。
6.研究的費用相對較經(jīng)濟
可提供大量、同一時(shí)期、重復性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗對象。

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細胞凍存：
對培養的細胞進(jìn)行凍存的最佳方法是將細胞置于含有(DMSO)等冷凍保護劑的*培養基中于液氮中儲存。冷凍保護劑可降低培養基的冰點(diǎn)，并可減緩冷卻速度嗎，大大降低冰晶形成的危險  (冰晶可損傷細胞，導致細胞死亡)。
注：DMSO 可促進(jìn)有機分子進(jìn)入組織。操作含DMSO的試劑時(shí)，應采用與此類(lèi)物質(zhì)安全危害相適應的設備和操作規范，并應按照當地法規處置此類(lèi)試劑。 
細胞凍存指導原則
凍存細胞系以備將來(lái)之用時(shí)，必須遵守以下原則。與其他細胞培養操作一樣，我們建議您嚴格遵守您所用細胞系附帶的操作說(shuō)明，以便獲得最佳結果。 
1）在高細胞濃度情況下進(jìn)行培養細胞的凍存，并且細胞傳代次數盡可能少。確保凍存前活細胞百分比至少為90%。請注意最佳凍存條件取決于所用細胞系。 
2）細胞應緩慢冷凍，可使用可控制降溫速度的低溫冰箱或者低溫冷凍容器使溫度每分鐘大約降低1°C。
3）必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑
4）將冷凍的細胞于 -70°C 以下溫度儲存；溫度高于 -50°C 時(shí)，冷凍的細胞將開(kāi)始變質(zhì)。 
5）必須使用無(wú)菌凍存管儲存冷凍的細胞。裝有冷凍細胞的凍存管可浸于液氮或者在液氮上方的氣相空間內保存 
6）必須穿戴個(gè)人防護設備。 
7）所有與細胞接觸的溶液和設備均應為無(wú)菌狀態(tài)。必須采用正確的無(wú)菌技術(shù)，并且在層流通風(fēng)櫥內進(jìn)行。
GDNF Others Human 人 GDNF 人細胞裂解液 (陽(yáng)性對照) SEQUENCINGGELLOADINGDYE,3X3X核酸電泳上樣緩沖液,測序用超級暗紫色微粘稠液體COLDsigma

大鼠神經(jīng)膠質(zhì)細胞*培養基 100mL溴化鎘 CcdMiuM broMidq 7789/4/6

MKN-45人胃癌細胞 Human gasic cancer cells MKN-45 1640+10% FBSD-(+)-基葡萄糖鹽... D-(+)-Glucosamine  (≥99%) 66-84-2 25G 通用試劑

IFNG Protein Mouse 重組小鼠 IFNG / Ierferon Gamma 蛋白 (His 標簽)N-芐氧羰基-D-本，英文名或英文縮寫(xiě)：Z-D-pxenylalaninol，級別：BR，98%，規格：10克

NCI-H157(人非小細胞肺腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 SRSV/3T3(SRSV轉化的3T3細胞)(L-抗壞血酸,維生素C)
A9(小鼠皮下結締組織細胞) 5×106cells/瓶×2糖精鈉標準溶液（1.00mg/mL,基體：水）Saccharin  salt solution質(zhì)量規格：1.00mg/mL,基體：水

PVRL2 Others Human 人 CD112 / Nectin-2 / PVRL2 人細胞裂解液 (陽(yáng)性對照) 桃醛（標準品）γ-Undecanolactone質(zhì)量規格：0.96

水牛皮膚成纖維樣細胞;WB-S5甲基壬基甲酮（標準品）2-Undecanone質(zhì)量規格：分析標準品

DKKL1 Others Human 人 DKKL1 / Soggy-1 / SGY-1 人細胞裂解液 (陽(yáng)性對照) 2′-脫氧胞苷 鹽酸鹽2′-Deoxycytidine 質(zhì)量規格：0.99

膠原酶(含10mL酶解緩沖液) 1mL1酸氫二銨Ammonium phosphatedi basic質(zhì)量規格：SP
人B淋巴細胞白血病細胞NRG1 Protein Canine 重組狗 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 標簽)2,9-二氯-1,10-菲羅啉(>97.0%(GC)(T))2,9-Dichloro-1,10-phenanthroline質(zhì)量規格：>97.0%(GC)(T)

MDA-MB-435(人癌高轉移細胞) 5×106cells/瓶×2 腦動(dòng)脈血管平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)3,4,7,8-四甲基-1,10-菲羅啉(>98.0%(HPLC)(T))3,4,7,8-Tetramethyl-1,10-phenanthroline質(zhì)量規格：>98.0%(HPLC)(T)

間充質(zhì)干細胞生長(cháng)添加物-無(wú)血清MSCGS-25,5'-硫代雙水楊酸(>98.0%(GC)(T))5,5'-Thiodisalicylic Acid質(zhì)量規格：>98.0%(GC)(T)

NRXN3 Others Human 人 NRXN3 / Neurexin-3-beta 人細胞裂解液 (陽(yáng)性對照) 4,4'-二氯二苯砜(>98.0%(GC))4,4'-Dichlorodiphenyl Sulfone質(zhì)量規格：>98.0%(GC)

COS-1 非洲綠猴SV40轉化的腎細胞雙[3,5-二溴-4-(2-羥乙氧基)苯基]砜(>96.0%(GC))Bis[3,5-dibromo-4-(2-hydroxyethoxy)phenyl] Sulfone質(zhì)量規格：>96.0%(GC)
實(shí)驗操作：
1、培養瓶預包被。試驗前一天預包培養瓶，置于超靜臺吹干或45℃烘箱烘干（切記保持無(wú)菌），4℃冰箱放置，備用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%麻醉，75%酒精浸泡，無(wú)菌條件下迅速取出大鼠主動(dòng)脈。
3、材料預處理：將獲取的血管放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反復洗滌，去除血管外部的洗滌液澄清，用無(wú)菌鑷子剝去外膜面的殘留組織。PBS洗滌凈。
4、除去內皮細胞：將血管縱向剪開(kāi)， 內膜面向上，無(wú)菌鑷子沿中軸方向反復刮動(dòng)內膜層4-5遍，去掉內皮細胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗滌3次。
5、分離中膜：將去掉內膜的血管，繼續刮動(dòng)分離中膜，去掉外膜，用眼科剪將內膜剪碎為1×1mm3的小塊，加入1 × PBS （pH 7.4 ），轉移到15ml 離心管中，PBS洗滌3次，離心收集沉淀物。
6、消化：在洗凈的內膜碎塊中加入消化酶液，將離心管放入37℃水浴消化15min。
7、終止消化：吸出消化液入新的離心管中，按1：1加入消化終止液，中止酶反應；余下的組織繼續加入消化液，消化15min ，重復消化3次。
8、收集重懸細胞：收集中止后的消化液于離心管中，1000 rpm，離心10 min，棄去上清，加入培養液重懸，染色計數細胞。
9、培養細胞密度：調整細胞密度以5 × 105個(gè)/ml 接種入培養瓶。
10、培養：放置于37℃，5% CO2培養箱中。

5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過(guò)夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。

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公司細胞現貨供應，質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗效果好，我司為您提供免費代測服務(wù)，同時(shí)提供最新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規格、用途、實(shí)驗原理等相關(guān)操作說(shuō)明。公司產(chǎn)品僅用于科研，不得用于臨床．

注意事項：
1.收到細胞后，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細胞先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置2-4小時(shí)（視細胞密度而定）穩定細胞狀態(tài)。接著(zhù)在倒置顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況，并對細胞進(jìn)行不同倍數拍照（建議收細胞時(shí)就整體外觀(guān)拍一張照片，觀(guān)察培養基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀(guān)察記錄細胞在運輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷(xiāo)售依據。
3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸等多方面因素影響，故本公司只保證客戶(hù)收到細胞后一周內的細胞狀態(tài)，故客戶(hù)需要售后時(shí)需出示收到細胞的時(shí)間證明及客戶(hù)提供收貨時(shí)間和發(fā)現問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
腺苷酸環(huán)化酶9抗體

細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀(guān)察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀(guān)察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉入液氮罐儲存。

NOG Others Human 人 Noggin 人細胞裂解液 (陽(yáng)性對照) γ-Globulinsfrombovineplood牛種球蛋白10kuBR，1000u/mg

CM-R076大鼠主動(dòng)脈平滑肌細胞*培養基100mL3-基派啶;3-基六輕; 3-哌可啉 3-Mqthylpipqridinq;3-Pipqcolinq; β-Pipqcolinq; 66-26-

ADCYAP1R1 Others Human 人 ADCYAP1R1 人細胞裂解液 (陽(yáng)性對照) VK41,4-二乙酰氧基-2-甲基奈5毫克IND

小鼠皮膚肥大細胞*培養基 100mLL-GLDHL-谷酸去氫酶100克BR，45000u/mg

SP2/0小鼠骨髓瘤細胞 Mouse myeloma cell line SP2/0 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS55-49-9清化鋅zin yeni7e
雜交瘤(B類(lèi));Z51B3C10H12A12G2F7B5納他霉素(標準品)Natamycin,Pimaricin質(zhì)量規格：含量測定,標準品

TE-10細胞，食管癌細胞 人食管癌細胞,TE-10細胞 敘利亞倉鼠腎細胞;BHK-21硝苯地平Nifedipine質(zhì)量規格：>99%,CP,AR

小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-B5硝苯地平（標準品）Nifedipine質(zhì)量規格：HPLC>98%,標準品

PDGFRA Others Human 人 PDGFRa / CD140a 人細胞裂解液 (陽(yáng)性對照) 尼莫地平Nimodipine質(zhì)量規格：>98.5%,可用于細胞培養

人成纖維細胞-胎兒總RNAHDF-f NA尼莫地平（標準品）Nimodipine質(zhì)量規格：HPLC>98%,標準品
濾泡性輔助性T細胞III型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL1,3-雙(4-氨苯氧基)苯(>98.0%(GC)(T))1,3-Bis(4-aminophenoxy)benzene質(zhì)量規格：>98.0%(GC)(T)

NCI-N87 [N87]人胃癌細胞 NCI-N87 human gasic cancer cells [N87] RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS4-氨基-4'-氯二苯(>97.0%(GC)(T))4-Amino-4'-chlorodiphenyl Ether質(zhì)量規格：>97.0%(GC)(T)

IL2 Protein Canine 重組狗 Ierleukin-2 / IL-2 蛋白 (147 Cys/Ser)1,4,8,12-四氮雜環(huán)十五烷(>97.0%(T))1,4,8,12-Tetraazacyclopentadecane質(zhì)量規格：>97.0%(T)

人外殼細胞(HHorSC)( 5×105 ) CSC, 小鼠心肌細胞 Mouse1,5,9-三氮雜環(huán)十二烷(>90.0%(GC))1,5,9-Triazacyclododecane質(zhì)量規格：>90.0%(GC)

非洲綠猴腎細胞系/HCV-E1;Vero-HCV-E11,4,7-三氮雜環(huán)壬烷(>98.0%(GC))1,4,7-Triazacyclononane質(zhì)量規格：>98.0%(GC)
細胞接受后的處理：
1） 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。若發(fā)現污染或疑似污染，請及時(shí)與我們取得聯(lián)系。
2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長(cháng)狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。
3） 棄去T25瓶中的培養基，添加6ml新的的*培養基。
4） 如果細胞長(cháng)滿(mǎn)（90%以上）請及時(shí)進(jìn)行細胞傳代。
5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，