細胞培養操作規程，供參考
一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備F-12K培養基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過(guò)夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。

公司細胞現貨供應，質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗效果好，我司為您提供免費代測服務(wù)，同時(shí)提供最新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規格、用途、實(shí)驗原理等相關(guān)操作說(shuō)明。公司產(chǎn)品僅用于科研，不得用于臨床．

注意事項：
1.收到細胞后，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細胞先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置2-4小時(shí)（視細胞密度而定）穩定細胞狀態(tài)。接著(zhù)在倒置顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況，并對細胞進(jìn)行不同倍數拍照（建議收細胞時(shí)就整體外觀(guān)拍一張照片，觀(guān)察培養基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀(guān)察記錄細胞在運輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷(xiāo)售依據。
3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸等多方面因素影響，故本公司只保證客戶(hù)收到細胞后一周內的細胞狀態(tài)，故客戶(hù)需要售后時(shí)需出示收到細胞的時(shí)間證明及客戶(hù)提供收貨時(shí)間和發(fā)現問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
腺苷酸環(huán)化酶9抗體

細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀(guān)察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀(guān)察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉入液氮罐儲存。

CM-H072人腎成纖維細胞*培養基100mL液體改良馬丁培養基shēng huà shì jì容量：250毫升

小鼠畸胎瘤細胞;F9 小鼠腸微血管細胞*培養基 100mL2-溴嘧啶 2-Bromopyrimidinq 4292-60-

RLF, 大鼠成纖維細胞 Rattus銀絲，英文名或英文縮寫(xiě)：Silver，級別：BR，99%，規格：100克

EPHB3 Others Mouse 小鼠 EPHB3 / HEK2 人細胞裂解液 (陽(yáng)性對照) 芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-酪酸shēng huà shì jì容量：RT，避光5克

EB病毒轉化的人B細胞;KMY09051988-6-22，4，6-三錄本酚 98%2,4,6-Trichloropxenol
Promocell C-26030 Renal Epithelial Cell GrowthMedium 2, 腎上皮細胞生長(cháng)培養基2型(即用型) 500ml羌活醇（標準品）Notopterol質(zhì)量規格：HPLC≥98%，標準品

上皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)10-羥基癸酸（標準品)10-Hydroxydecanoic acid質(zhì)量規格：HPLC≥96%，標準品

HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/4664T/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細胞裂解液 (陽(yáng)性對照) 羥基紅花黃色素A(標準品)Hydroxysafflor yellow A質(zhì)量規格：HPLC≥98%,標準品

KM小鼠網(wǎng)織細胞肉瘤瘤株;LⅡ馬兜鈴酸A去甲基代謝產(chǎn)物Aristolochic Acid Ia質(zhì)量規格：美國進(jìn)口

中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-beta2(414) CL.32 pTGF-beta2(414) 前列腺癌細胞，RM-1細胞 S37細胞，小鼠肉瘤細胞羥基積雪草苷（標準品）Madecassoside質(zhì)量規格：HPLC≥98%，標準品
大鼠鼻咽癌細胞Promocell C-24010 MelanocyteGrowthMedium , 色素細胞生長(cháng)培養基(即用型) 500ml鳥(niǎo)苷酰(2' 5')腺苷銨鹽Guanylyl(2' 5')adenosine ammonium salt 質(zhì)量規格：美國進(jìn)口

骨骼肌細胞培養基SkMCM-prf5‘-O-乙酰腺苷5'-O-Acetyl Adenosine  質(zhì)量規格：美國進(jìn)口

HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/USSR/90/1977) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細胞裂解液 (陽(yáng)性對照) 2-（標準品）2-Phenylacetamide質(zhì)量規格：系統適應性

人胚腎細胞(SV40T基因修飾);293T/17依諾沙星(標準品）Enoxacin質(zhì)量規格：含量測定

大鼠骨骼肌成肌細胞;L6 惡性色素瘤細胞，A-375[A375]細胞 RF/6A細胞，綠猴猴脈絡(luò )膜-視網(wǎng)膜(內皮)細胞[Nle4,DPhe7] a-促激素酰胺; 美拉諾坦 I[Nle4,DPhe7] a-MSH, amide; Melanotan I質(zhì)量規格：>95%,BR
細胞接受后的處理：
1） 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長(cháng)狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。
3） 棄去T25瓶中的培養基，添加6ml新的的*培養基。
4） 如果細胞長(cháng)滿(mǎn)（90%以上）請及時(shí)進(jìn)行細胞傳代。
5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，