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簡(jiǎn)要描述:NADP蘋(píng)果酸酶(NADPME)測試盒微量法輔酶Ⅱ系列公司正在出售的產(chǎn)品:含225ml LB1肉湯均質(zhì)袋 英文名稱(chēng):LB1 Broth 產(chǎn)品規格:10個(gè)/包 萘啶酮酸(5.0mg) 英文名稱(chēng):Nalidixic Acid 產(chǎn)品規格:5.0mg/支*5 含225ml FB1增菌液均質(zhì)袋 英文名稱(chēng):FB1 Broth 產(chǎn)品規格:10個(gè)/包 FB1(Half-Fraser)添加劑(A、B) 英文名稱(chēng):F
詳細介紹
商品介紹:
測定意義: ME廣泛存在于微生物、培養細胞、動(dòng)物和植物胞漿中,尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋(píng)果酸氧化脫羧的可逆反應,產(chǎn)生丙酮酸和CO2,以及伴隨NAD(P)+的還原反應,是蘋(píng)果酸代謝的關(guān)鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來(lái)植物ME活性測定較多,已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點(diǎn)。根據輔酶專(zhuān)一性和對底物特異性的不同,可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。 測定原理: NADP-ME催化NADP+還原成NADPH,在340nm下測定NADPH增加速率。 需自備的儀器和用品: 紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。 |
提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗室提供免費代測,7個(gè)工作日出結果,提供原始數據!
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規格 | 檢測方法 | 貨號 |
NADP蘋(píng)果酸酶(NADPME)測試盒微量法 | 100管/96樣 | 微量法 | BK-01S6357 |
實(shí)驗結果判斷我有妙招:
1、定量測定結果根據標準曲線(xiàn)計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結果的閾值。
3、以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應后,肉眼觀(guān)察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
與您分享常用不穩定試劑的分類(lèi)及要求:
① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封,放于陰涼、通風(fēng)、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣,水發(fā)生反應的物質(zhì)要密封,并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑,應將其固體或晶體密封保存,不宜長(cháng)期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應的物質(zhì)要密封保存,其相應的溶液較固體更易反應,所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風(fēng)處保存。
操作步驟:
1. 樣品的準備:
a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類(lèi)常見(jiàn)電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備:動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類(lèi)常見(jiàn)電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細胞和組織的差異會(huì )比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續檢測。
e. 根據蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據待檢測樣品(包括標準品) 數量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動(dòng)工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋?zhuān)礊榉磻獑?dòng)工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。
c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測。說(shuō)明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現稀釋現使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽(yáng)性對照或作為對SOD活性定量的參考。
2 ug pFastBac1-Gus pFastBac1-Gus 低溫運輸,-20℃保存
沙氏葡萄糖瓊脂培養基(SDA)(2015藥典) Sabouraud Dextrose Agar 250g
1瓶 C6細胞株 C6 低溫運輸和保存
大腸桿菌/大腸菌群顯色培養基(第二代) E.Coli/Coliform Chromogenic Medium 1000(ML)
300U T7 DNA 聚合(未修飾) T7 DNA Polymerase(unmodified) -20℃保存
500mL Phosphate Buffer,0.2M, pH6.8 Phosphate Buffer,0.2M, pH6.8 常溫保存
0.1mL×10 BL21(DE3)pLysS化學(xué)感受態(tài)細胞 BL21 (DE3) pLysS Competent Cell -80℃保存
250mL MOPS Buffer,1.0M,pH7.0 MOPS Buffer,1.0M,pH7.0 常溫保存
1/2MS培養基 1/2MS Medium 250g
1瓶 U-2 OS-Luc teT-on細胞株 U-2 OS-Luc teT-on 低溫運輸和保存
M-肉湯 M-Broth 250g
NADP蘋(píng)果酸酶(NADPME)測試盒微量法HDAC5 組蛋白去乙?;?抗體 規格: 0.1ml
HBXIP 毒X蛋白相互作用蛋白 規格: 0.2ml
Phospho-PLK1(Thr210) 磷酸化絲/蘇蛋白激Plk1抗體 規格: 0.1ml
CHCHD6 卷曲螺旋結構域蛋白CHCHD6抗體 規格: 0.2ml
KMT1C/G9a 組蛋白H3賴(lài)9甲基化1C抗體 規格: 0.2ml
PRL 泌素抗體 規格: 0.2ml
EDG7/LPA3 溶磷脂酸受體蛋白3抗體 規格: 0.2ml
SEPT10 細胞分化蛋白SEPT10抗體 規格: 0.2ml
ADAMTS7(NT) 整合素樣金屬蛋白與凝1型-7抗體 (N端抗體) 0.1ml
CD177/NB1 嗜中性粒細胞抗原CD177抗體 規格: 0.2ml
LAS2/C18orf54 肺瘤易蛋白2抗體 規格: 0.2ml
TIEG1/KLF10 TGF-β誘導早期應答基因1抗體 規格: 0.2ml
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