注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

原理是由一對引物介導，能在動(dòng)植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴增，經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實(shí)性；
?
實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

SPC-A-1(人肺細胞)5×106cells/瓶×2

大鼠尿道上皮細胞*培養基100mL

苜蓿中華瘤菌人腎透細胞皮膚轉移細胞

HC瓊脂基礎/HC Agar Base妝品中霉菌總數測定250克國產(chǎn)/進(jìn)口

TSN瓊脂/胰蛋白胨亞硫酸新霉素瓊脂/胰酪胨亞硫酸新霉素瓊脂/胰酶亞硫酸新霉素瓊脂/TSN Agar用于梭菌的檢測250克國產(chǎn)/進(jìn)口

節律晝夜蛋白1(PER1)重組蛋白英文名稱(chēng)：Recombinant Period Circadian Protein 1 (PER1)

小鼠肺大動(dòng)脈平滑肌細胞*培養基曲霉 Aspergillus niger

腺英文名稱(chēng)：MDA-MB-157

AC肉湯/通用培養肉湯/AC Broth用于常見(jiàn)微生物增菌培養和不含防腐劑樣品的無(wú)菌試驗250克國產(chǎn)/進(jìn)口

宇佐美曲霉變種 Aspergillus usamii var.枯草芽胞桿菌 Bacillus subtilis

炭曲霉 Aspergillus carbonariusWERI-Rb-1(人視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞)

火雞皰疹病毒PCR檢測試劑盒價(jià)格大鼠膀胱上皮細胞*培養基BE(2)-M17(人神經(jīng)母細胞瘤細胞)

土星孢青霉 Eupenicillium saturniforme短梗青霉 Penicillium brevistipitatum

馬克斯克魯維酵母 Kluyceromyces marxianus根瘤菌

Hepa 1-6(小鼠肝細胞)SP Rabbit & Mouse HRP Kit、兔/鼠通用型Streptavidin-HRP試劑盒

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

純白鏈霉菌 Streptomyces candidus香菇 Lentinula edodes

大鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細胞*培養基人髓性紅白血病細胞

酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp.lactis香菇 Lactarius camphoratus

蘋(píng)果黑腐皮殼BABL/C小鼠胚胎成纖維細胞

小鼠畸胎瘤細胞釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

人氣管平滑肌細胞*培養基紫紅曲霉 Monascus purpureus

嗜酸桿菌 Lactobacillus acidophilus人骨骼肌細胞*培養基

豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna786-O [786-0], 人腎透腺細胞

TSCCa(人舌鱗細胞)鼠李糖桿菌 Lactobacillus rhamnosus

糖丁酸梭菌 Clostridium saccharobutyricum蘇云金芽孢桿菌 Bacillus thuringiensis

中慢生華癸根瘤菌 Mesorhizobium huakuiiTE-10(人食管細胞)

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應實(shí)驗中發(fā)現，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）
       發(fā)現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應用，并逐步應用于臨床。