注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

原理是由一對引物介導，能在動(dòng)植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴增，經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實(shí)性；
?
實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

衛矛醇半固體瓊脂/Dulcitol Semisolid Agar細菌衛矛醇發(fā)酵試驗10克國產(chǎn)/進(jìn)口

五號膽/5號膽/膽5號/膽酸-脫氧膽混合物/Bile salt No. 5BR，70%25克國產(chǎn)/進(jìn)口

人臍帶單核細胞*培養基PANC-1(人胰腺細胞)

酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp. Lactis釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

哥倫比亞CAN瓊脂基礎/Columbia CAN Agar Base分離革蘭氏陽(yáng)性球菌250克國產(chǎn)/進(jìn)口

LM/TK(小鼠胸腺激酶缺陷細胞)蘇云金芽胞桿菌多窩亞種 Bacillus thuringiensis subsp. tolwerthi

大鼠角膜成纖維細胞*培養基小鼠晶狀體上皮細胞*培養基

NCI-H661(人大細胞肺細胞)5×106cells/瓶×2

CCD-1095Sk(人腺浸潤性導管旁膚細胞)5×106cells/瓶×2

RH-35(大鼠肝細胞)釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

T84(人結腸腺肺轉移細胞)人腎成纖維細胞*培養基

豬瘟病毒野生株PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)中性蛋白酶(含100mL酶解緩沖液)10mL

雙歧桿菌瓊脂培養基（BBL瓊脂培養基） 規格： 250g 用途： 用于雙歧桿菌的平板計數

血紅蛋白(HB)天然蛋白   Native Hemoglobin (HB)  

補體成分7(C7)重組蛋白  Recombinant Complement Component 7 (C7)

基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP13)重組蛋白  Recombinant Matrix Metalloproteinase 13 (MMP13)

神經(jīng)生長(cháng)因子(NGF)重組蛋白  Recombinant Nerve Growth Factor (NGF)

運動(dòng)因子相關(guān)蛋白1(MRP1)重組蛋白  Recombinant Motility Related Protein (MRP1)

HSC-T6(大鼠肝星形細胞)5×106cells/瓶×2

M-NFS-60 (小鼠白血病細胞G-CSF依賴(lài)性)5×106cells/瓶×2

USMC(大鼠血管平滑肌細胞)5×106cells/瓶×2

人食管細胞  Kyse510

小鼠淋巴瘤細胞  EL4

細菌L型分離瓊脂L型細菌增菌培養110克國產(chǎn)/進(jìn)口

鈉蔗糖瓊脂/Sodium Chloride Sucrose Agar副溶血性弧菌的選擇性分離培養250克國產(chǎn)/進(jìn)口

標準胎牛血清/Fetal bovine serum(Characterized FBS)BR200毫升國產(chǎn)/進(jìn)口

CCDA添加劑/CCDA Supplement添加于200Lccda基礎中2毫升×10支國產(chǎn)/進(jìn)口

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應實(shí)驗中發(fā)現，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）
       發(fā)現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應用，并逐步應用于臨床。