原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；

注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

?
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復(fù)制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。

ZR-75-1(人腺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

熱帶假絲酵母 Candida tropicalis費氏中華瘤菌 Sinorhizobium fredii

NAMALWA(人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

人腦動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

異常漢遜酵母 Hansenula anomala馬克斯克魯維酵母 Kluyveromyces marxianus

WTRL1(大鼠肺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

大鼠腺上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

MRC5/成纖維細(xì)胞株國產(chǎn)gersion

熱帶假絲酵母 Candida tropicalis野油菜黃單胞菌 Xanthomonas campestris

灰色裂孢鏈霉菌 Streptomyces griseosegmentosus

ARPE-19(人視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞)釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

雞貧血病毒PCR檢測試劑盒價格小紅酵母 Rhodotorula MiuntaA2(人腺樣囊性細(xì)胞)

爪哇正青霉 Eupenicillium javanicum炭黑曲霉 Aspergillus carbonarius

藍色預(yù)染中分子量蛋白Marker費氏中華根瘤菌 Sinorhizobium fredii

MA, 小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞KATO III(人胃細(xì)胞)

酸球菌脂亞種 Lactococcus lactis subsp. cremoris釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna腐皮鐮孢 Fusarium solani

KiMA(人胚腎上皮細(xì)胞系)肺

瑞士桿菌 Lactobacillus helveticus熱帶假絲酵母 Candida tropicalis

雅致放射毛霉 Actinomucor elegans蟲草 Cordyceps sp.

大鼠胎兒成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基小鼠牙細(xì)胞*培養(yǎng)基

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae葡萄汁酵母 Saccharomyces uvarum

豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna保加利亞桿菌 Lactobacillus bulgaricus

CRT(人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞)BC3H1(小鼠腦瘤細(xì)胞)

植物桿菌 Lactobacillus plantarum酒假絲酵母 Candida kefyr

根瘤菌 Rhizobium sp.豌豆根瘤菌 Rhizobium leguminosarum