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簡(jiǎn)要描述:波氏桿菌通用PCR檢測試劑盒廠(chǎng)家上海帛科生物相關(guān)產(chǎn)品:Vero(非洲綠猴腎細胞)5×106cells/瓶×2P3X63Ag8.653(小鼠骨髓瘤細胞)5×106cells/瓶×2腺 MA891瘤人肝星形細胞 LX-2胰膘湯基礎/胰示湯基礎/胰月示湯基礎/Tryptose Broth Base用
詳細介紹
技術(shù)原理:
DNA的半保留復制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實(shí)驗中發(fā)現,DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動(dòng)子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發(fā)現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應用,并逐步應用于臨床。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時(shí)間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動(dòng)力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 貨號 |
波氏桿菌通用PCR檢測試劑盒廠(chǎng)家 | Bordetella spp.PCR | BK-P8893 |
原理是由一對引物介導,能在動(dòng)植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實(shí)性;?
實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
豇豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium vigna中慢生華癸瘤菌 Mesorhizobium huakuii
淡紫擬青霉 Paecilomyces lilacinus戊糖桿菌 Lactobacillus pentosus
脫羧酶對照試驗培養基/Decarboxylase Control Medium脫羧酶試驗陰性對照(無(wú)氨基酸)5克國產(chǎn)/進(jìn)口
氣單胞菌培養基基礎/Aeromonas Medium Base(Ryan)氣單胞菌分離培養250克國產(chǎn)/進(jìn)口
苜蓿中華瘤菌 Sinorhizobium meliloti釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
冬擬多孔菌吳茱萸堿
貂肺上細胞英文名稱(chēng):Mv 1 lu
苜蓿中華瘤菌湯卜遜沙門(mén)氏菌 Salmonella thompson
RBE, 人肝膽管細胞人非小細胞肺細胞
小鼠腺腫瘤細胞英文名稱(chēng):C127
NCI-H1688(人典型小細胞肺細胞)5×106cells/瓶×2gersion
波氏桿菌通用PCR檢測試劑盒廠(chǎng)家白介素18(IL18)重組蛋白 Recombinant Interleukin 18 (IL18)
骨成型蛋白7(BMP7)重組蛋白 Recombinant Bone Morphogenetic Protein 7 (BMP7)
凝溶膠蛋白(GS)重組蛋白 Recombinant Gelsolin (GS)
序列相似家族132成員A(FAM132A)重組蛋白 Recombinant Family With Sequence Similarity 132, Member A (FAM132A)
CHO-K1(倉鼠卵巢細胞亞株)5×106cells/瓶×2
Vero(非洲綠猴腎細胞)5×106cells/瓶×2
P3X63Ag8.653(小鼠骨髓瘤細胞)5×106cells/瓶×2
腺 MA891瘤
人肝星形細胞 LX-2
胰膘湯基礎/胰示湯基礎/胰月示湯基礎/Tryptose Broth Base用于肺炎鏈球菌、布魯氏菌細菌的培養250克國產(chǎn)/進(jìn)口
牛蛋白胨/蛋白胨/Beef PeptoneBR250克國產(chǎn)/進(jìn)口
副溶血性弧菌瓊脂副溶血性弧菌的選擇性分離培養250克國產(chǎn)/進(jìn)口
Littman瓊脂/Littman Agar真菌的分離培養250克國產(chǎn)/進(jìn)口
人肝竇內皮細胞*培養基100mL
大鼠成骨細胞*培養基100mL
酵母葡萄糖氯霉素瓊脂 規格: 250g 用途: 用于牛奶和制品中霉菌及酵母菌總數測定
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