注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

原理是由一對引物介導，能在動(dòng)植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴增，經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實(shí)性；
?
實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

kasumi-1, 人白血病細胞株人腺高轉移細胞

AtT-20(小鼠垂體瘤細胞)5×106cells/瓶×2

人結腸平滑肌細胞*培養基100mL

MKN-28(人胃高轉移細胞)5×106cells/瓶×2gersion

Hep G2(人肝細胞)5×106cells/瓶×2

柄鏈格孢=柄格孢菌 Alternaria longipes糙皮側耳 Pleurotus ostreatus

金色產(chǎn)色鏈霉菌 Streptomyces aureochromogenes植物桿菌 Lactobacillus plantarum

人卵巢紫杉醇耐藥株英文名稱(chēng)：A2780/Taxol 

Bolton肉湯基礎 規格： 250g 用途： 用于空腸彎菌的選擇性增菌(GB)，每100mL基礎培養基需添加1支配套試劑(SR0340)

大鼠腎小管平滑肌細胞*培養基100mL

A-498(人腎細胞)5×106cells/瓶×2

牛紐布病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)氣單胞菌鑒別瓊脂/Aeromonas Differential Agar分離培養和鑒別氣單胞菌250克國產(chǎn)/進(jìn)口

人結腸紫杉醇耐藥  HCT/Taxol

酒假絲酵母 Candida kefyr戊糖桿菌 Lactobacillus pentosus

地衣芽孢桿菌 Bacillus licheniformisES-2(人卵巢透細胞細胞)

腫瘤壞死因子α誘導蛋白6(TNFαIP6)重組蛋白  Recombinant Tumor Necrosis Factor Alpha Induced Protein 6 (TNFaIP6)

改良Giolitti-Cantobi肉湯/Modified Giolitti-Cantobi Broth用于金黃色葡萄球菌的增菌培養250克國產(chǎn)/進(jìn)口

MLTC-1(小鼠睪間質(zhì)細胞瘤細胞)SCaBER(人膀胱鱗細胞)

菜豆瘤菌 Mesorhizobium phaseoli香菇 Lentinula edodes

暗產(chǎn)色鏈霉菌 Streptomyces phaeochromogenesEBV-轉化人淋巴細胞

綠膿菌素測定用培養基（PDP） 規格： 250g 用途： 用于鑒別綠膿桿菌產(chǎn)生綠膿菌素試驗(GB15979-2002，(化妝品衛生規范微生物檢驗方法2007版)。

碳酸酐酶Ⅱ(CA2)天然蛋白   Native Carbonic Anhydrase II (CA2)

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應實(shí)驗中發(fā)現，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）
       發(fā)現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應用，并逐步應用于臨床。