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PCR檢測試劑盒的原理介紹

更新時(shí)間:2021-10-20      點(diǎn)擊次數:1095
       PCR檢測試劑盒的原理介紹
  IL-Ielisa檢測試劑盒PCR技術(shù),即聚合酶鏈反應(polymerasechainreaction,PCR)是由美國PECetus公司的KaryMullis在1983年(1993年獲諾貝爾化學(xué)獎)建立的。這項技術(shù)可在試管內的經(jīng)數小時(shí)反應就將特定的DNA片段擴增數百萬(wàn)倍,這種迅速獲取大量單一核酸片段的技術(shù)在分子生物學(xué)研究中具有舉足輕重的意義,極大地推動(dòng)了生命科學(xué)的研究進(jìn)展。它不僅是DNA分析的技術(shù),而且在DNA重組與表達、基因結構分析和功能檢測中具有重要的應用價(jià)值。
  PCR可以被認為是與發(fā)生在細胞內的DNA復制過(guò)程相似的技術(shù),其結果都是以原來(lái)的DNA為模板產(chǎn)生新的互補DNA片段。細胞中DNA的復制是一個(gè)非常復雜的過(guò)程。參與復制的有多種因素。PCR是在試管中進(jìn)行的DNA復制反應,基本原理與細胞內DNA復制相似,但反應體系相對較簡(jiǎn)單。
  PCR由變性--退火--延伸三個(gè)基本反應步驟構成:①模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時(shí)間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應做準備;
 ?、谀0錎NA與引物的退火(復性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;
 ?、垡锏难由欤篋NA模板--引物結合物在Taq酶的作用下,以dNTP為反應原料,靶序列為模板,按堿基配對與半保留復制原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈。
  IL-Ielisa檢測試劑盒重復循環(huán)變性--退火--延伸三過(guò)程,就可獲得更多的“半保留復制鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個(gè)循環(huán)需2~4分鐘,2~3小時(shí)就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬(wàn)倍。

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