昆蟲(chóng)卵巢細胞；SF9培養復蘇操作要點(diǎn)：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿(mǎn)37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過(guò)zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶?jì)?，補加適量的培養基，輕輕晃動(dòng)細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）第二天觀(guān)察細胞貼壁生長(cháng)情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長(cháng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進(jìn)行后續的實(shí)驗。